PCR擴(kuò)增對(duì)污染極其敏感，污染可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不正確。這可能令人沮喪和困惑，尤其是如果您知道引物和模板正確，并且具有預(yù)期擴(kuò)增子的確切長(zhǎng)度，則尤其如此。模板，基因組DNA或先前反應(yīng)中的擴(kuò)增子對(duì)試劑的污染會(huì)導(dǎo)致過(guò)多或意外的信號(hào)。良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范可以每次幫助控制污染并確保準(zhǔn)確的結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)室最佳實(shí)踐

• 最大限度地減少基因組DNA來(lái)源的潛在暴露。摻入DNase以降解DNA鏈，并確保您的引物跨越兩個(gè)外顯子。此外，通過(guò)將“ no-RT”控件整合到實(shí)驗(yàn)中，您可以快速識(shí)別RNA制備物中的污染物。
• 創(chuàng)建單向工作流。在單獨(dú)的干凈空間中進(jìn)行準(zhǔn)備的每個(gè)步驟，以防止殘留污染。將酶，水，引物和探針以及其他配件存放在沒(méi)有隔離或存儲(chǔ)模板的房間中。
• 集成無(wú)塵室和層流柜以保護(hù)樣品。無(wú)塵室和設(shè)備可以幫助防止各種外部污染。
• 使用過(guò)濾器提示進(jìn)行所有移液操作。過(guò)濾嘴可在移液器和被測(cè)液體之間提供屏障，防止?jié)撛诘臍馊苣z殘留。

PCR無(wú)管設(shè)備

PCR層流柜可以通過(guò)采用HEPA過(guò)濾技術(shù)幫助維持無(wú)污染的環(huán)境，同時(shí)還可以靈活地訪問(wèn)柜中的儀器。PCR通風(fēng)柜是獨(dú)立設(shè)備，可在幾乎任何實(shí)驗(yàn)室空間內(nèi)快速安裝，而無(wú)需昂貴的管道系統(tǒng)或復(fù)雜的接線。

無(wú)管層流通風(fēng)柜是為臺(tái)式使用而設(shè)計(jì)的，也可以放置在底座或移動(dòng)推車上以方便使用。內(nèi)部空氣處理系統(tǒng)的流速為90 fpm，可有效地將潛在的污染物從PCR混合物中帶走，而HEPA過(guò)濾器對(duì)0.3微米顆粒的效率高達(dá)99.99％。